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1、目的基因片段的獲?。耗康幕虻淖槌桑閡桓瞿蘢擠氳慕峁夠蠐Πㄗ計(jì)舳⒑頌翹迨侗鵯⒈嗦肭⒑妥賈罩骨?。
2、獲得途徑:1限制性內(nèi)切酶酶切法2利用PCR技術(shù)直接擴(kuò)增目的基因3目的基因的化學(xué)合成4通過構(gòu)建基因組文庫或CDNA文庫分離目的基因5反向轉(zhuǎn)錄法分離目的基因目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞:原核生物最理想受體細(xì)胞:大腸桿菌、枯草桿菌、藍(lán)藻、棒狀桿菌 。
3、真核生物應(yīng)用最廣的受體細(xì)胞:酵母細(xì)胞途徑:1電穿孔法2基因槍法3激光微束穿孔法4顯微注射法5多聚物介導(dǎo)法6脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法克隆子的篩選鑒定:克隆子的篩選方法:1根據(jù)載體選擇標(biāo)記基因2根據(jù)報(bào)告基因 3根據(jù)PCR擴(kuò)增片段4根據(jù)限制性核酸內(nèi)切酶圖譜分析5采用DNA雜交法6應(yīng)用DNA芯片7DNA核苷酸序列測定 。
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