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單克隆抗體的制備步驟

單克隆生活百科

【單克隆抗體的制備步驟】1、免疫動物
免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的過程；
2、細胞融合
采用眼球摘除放血法處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，制備脾細胞懸液 。將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇 。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合，形成雜交瘤細胞；
3、選擇性培養
選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般采用HAT選擇性培養基；
4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化
采用靈敏、快速、特異的免疫學方法，篩選出能產生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，并進行克隆擴增；
5、單克隆抗體的大量制備
單克隆抗體的大量制備一般采用動物體內誘生法和體外培養法 。