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簡述PCR技術(shù)操作步驟

原理:
DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)簡稱PCR技術(shù),是一種以模板DNA為基?。?在引物和4種脫氧核糖核苷酸存在的條件下 , 利用DNA聚合酶的酶促反應(yīng),完成對模板的目的片段的快速擴(kuò)增的過程 。
步驟為:
【簡述PCR技術(shù)操作步驟】(1)變性:雙鏈DNA在94℃條件下,通過熱變性使模板的雙鏈DNA氫鍵斷裂變成單鏈 。
(2)復(fù)性:當(dāng)變性溫度突然降至引物Tm值(通常為35~65℃)以下時(shí),會(huì)使引物與模板DNA互補(bǔ)序列雜交 。由于引物一般由10~25個(gè)堿基序列,模板DNA結(jié)構(gòu)遠(yuǎn)比引物分子復(fù)雜,且反應(yīng)體系中引物分子的濃度又遠(yuǎn)大于模板DNA , 故在退火溫度時(shí),引物與模板DNA容易結(jié)合形成互補(bǔ)鏈 。
(3)延伸:在DNA聚合酶的作用下,以DNA為模板和以4種脫氧核糖核苷酸為原料,在Mg2+存在的條件下 。DNA聚合酶依賴于其5'→3'的聚合酶活力,以引物結(jié)合于DNA模板鏈為起始點(diǎn) 。使引物的序列得以延伸,合成模板DNA的互補(bǔ)鏈 。