細(xì)胞培養(yǎng)步驟細(xì)胞培養(yǎng)步驟哪里確保無(wú)菌 _知識(shí)經(jīng)驗(yàn)

【細(xì)胞培養(yǎng)步驟細(xì)胞培養(yǎng)步驟哪里確保無(wú)菌】

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大家好,小跳來(lái)為大家解答以上的問(wèn)題。細(xì)胞培養(yǎng)步驟哪里確保無(wú)菌，細(xì)胞培養(yǎng)步驟這個(gè)很多人還不知道,現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧！
1、一、復(fù)蘇1.把凍存管從液氮中取出來(lái) ，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(dòng) 。
2、液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。
3、2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中（用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來(lái)），1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
4、3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來(lái) 。
5、吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動(dòng)，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。
6、4.標(biāo)好細(xì)胞種類(lèi)和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。
7、5.3天換一次培養(yǎng)基。
8、二、傳代1.培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。
9、2.把原有培養(yǎng)基吸掉。
10、3.加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細(xì)胞就行），消化1-2分鐘。
11、4.細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
12、5.用移液槍吹打細(xì)胞，把細(xì)胞都懸浮起來(lái) 。
13、6.把細(xì)胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
14、7.倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來(lái) 。
15、8.根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。
16、一般，癌細(xì)胞分5個(gè)，正常細(xì)胞傳3個(gè) 。
17、繼續(xù)培養(yǎng) 。
18、三、凍存把細(xì)胞消化下來(lái)并離心（同上）。
19、用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來(lái)，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫(xiě)明細(xì)胞種類(lèi)，凍存日期。
20、4℃ 30min ， -20℃ 30min，-80℃過(guò)夜，然后放到液氮灌中保存。
21、凍存液的配制： 70%的完全培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。
22、要注意的就是無(wú)菌操作！。
本文到此分享完畢，希望對(duì)大家有所幫助。

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