質粒的組成要素有哪些如何尋找載體上的核糖體結合位點 _經驗分享

質粒圖譜為質粒DNA序列的物理圖譜，提供了包括質粒的大小、篩選標記、克隆位點、轉錄及翻譯元件等信息，為我們選擇質粒、了解質粒特點及應用提供了重要依據。對于初學者來說改如何去閱讀質粒圖譜呢？今天來給大家講解一下如何閱讀質粒圖譜，底部還有質粒、酶切切點選擇的相關教學視頻。
質粒的組成要素有哪些
復制起始位點：Ori 即控制復制起始的位點。原核生物 DNA 分子中只有一個復制起始點。而真核生物 DNA 分子有多個復制起始位點。
抗生素抗性基因：可以便于加以檢測，如 Amp+ ,Kan+ 。
多克隆位點MCS：克隆攜帶外源基因片段。
P/E 啟動子/增強子
Terms 終止信號
加poly（A）信號：可以起到穩定 mRNA 作用

文章插圖

如何閱讀質粒圖譜
第一步：首先看 Ori 的位置，了解質粒的類型（原核/真核/穿梭質粒）。
第二步：再看篩選標記，如抗性，決定使用什么篩選標記。
Ampr 水解 β－內酰胺環，解除氨芐的毒性。
tetr 可以阻止四環素進入細胞。
camr 生成氯霉素羥乙酰基衍生物，使之失去毒性。
neor（kanr）氨基糖苷磷酸轉移酶使 G418（長那霉素衍生物）失活。
hygr 使潮霉素 β 失活。
第三步：看多克隆位點（MCS）。
它具有多個限制酶的單一切點。便于外源基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入，會導致某種標志基因的失活，而便于篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源 DNA 插入片段大小。
質粒一般只能容納小于 10 Kb 的外源 DNA 片段。一般來說，外源 DNA 片段越長，越難插入，越不穩定，轉化效率越低。
第五步：是否含有表達系統元件，即啟動子－核糖體結合位點－克隆位點－轉錄終止信號。
這是用來區別克隆載體與表達載體。克隆載體中加入一些與表達調控有關的元件即成為表達載體。選用那種載體，還是要以實驗目的為準繩。
啟動子－核糖體結合位點－克隆位點－轉錄終止信號
啟動子－促進 DNA 轉錄的 DNA 順序，這個 DNA 區域常在基因或操縱子編碼順序的上游，是 DNA 分子上可以與 RNApol 特異性結合并使之開始轉錄的部位，但啟動子本身不被轉錄。
增強子/沉默子－為真核基因組（包括真核病毒基因組）中的一種具有增強鄰近基因轉錄過程的調控順序。其作用與增強子所在的位置或方向無關。即在所調控基因上游或下游均可發揮作用。/沉默子－負增強子，負調控序列。
核糖體結合位點/起始密碼/ SD 序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA 有核糖體的兩個結合位點，對于原核而言是 AUG（起始密碼）和 SD 序列。
轉錄終止順序（終止子）/翻譯終止密碼子：結構基因的最后一個外顯子中有一個 AATAAA 的保守序列，此位點 down－stream 有一段 GT 或 T 富豐區，這 2 部分共同構成 poly（A）加尾信號。結構基因的最后一個外顯子中有一個 AATAAA 的保守序列，此位點 down－stream 有一段 GT 或 T 富豐區，這 2 部分共同構成 poly（A）加尾信號。
第六步：質粒圖譜上的箭頭。
【質粒的組成要素有哪些如何尋找載體上的核糖體結合位點】有的箭頭順時針有的箭頭逆時針，那其實是代表兩條 DNA 鏈，即質粒是環狀雙鏈 DNA，它的啟動子等在其中一條鏈上，而它的抗性基因在另一條鏈上。

質粒的組成要素有哪些 如何尋找載體上的核糖體結合位點

質粒的組成要素有哪些如何尋找載體上的核糖體結合位點