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菌種保存的方法有哪些，菌種傳代操作規程

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菌種保存的方法有哪些，菌種傳代操作規程

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菌種保存的方法有哪些，菌種傳代操作規程

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回答菌種保存的方法有斜面低溫保藏法、液體石蠟覆蓋保藏法、沙土保藏法、濾紙保藏法、甘油管保存法、冷凍干燥保存法 。1、斜面低溫保藏法：將菌種接種到適合的固體斜面培養基上，用油紙將棉塞部分包扎好，然后轉移至2-8℃的冰箱中進行保存 。2、液體石蠟覆蓋保藏法：使用液體石蠟將斜面菌覆蓋住，使其和空氣隔絕 。
一、菌種保存的方法有哪些
1、斜面低溫保藏法
（1）將菌種接種到適合的固體斜面培養基上 ， 等到菌種充分生長過后 ， 使用油紙將棉塞部分包扎好，然后轉移至2-8℃的冰箱中進行保存 。
（2）如果是霉菌、放線菌及有芽孢的細菌，一般可以保存2-4個月左右，需要移種一次 。如果是酵母菌，一般可以保存2個月左右 ， 需要每個月移種一次 。
2、液體石蠟覆蓋保藏法
（1）將液體石蠟裝在三角燒瓶中，并使用棉塞塞好 ， 用牛皮紙進行包扎 ， 然后在0.1MPa，121.3℃的環境下滅菌30分鐘左右 ， 接著將其放置在40℃的溫箱之中 ， 將水汽蒸發掉 。
（2）將需要保藏的菌種，用適合的斜面培養基進行培養 ， 得到健壯的孢子或者是菌體 。
（3）使用滅菌過的吸管將液體石蠟吸出 ， 注入斜面上，用量為高出斜面頂端1cm左右為宜 。
【菌種保存的方法有哪些，菌種傳代操作規程】（4）將試管直立，放置在低溫或者是室溫之下進行保存 。
（5）霉菌、放線菌、芽孢細菌可以保藏2年以上不死，酵母菌可以保藏1-2年 ， 一般無芽孢細菌可以保藏1年，腦膜炎球菌可以保藏3個月左右（37℃環境下） 。
3、沙土保藏法
（1）準備好河沙 ， 加入10%稀鹽酸，然后加熱煮沸30分鐘左右，將里面的有機質去掉，然后將酸水倒掉，用自來沖洗至ph為中性，接著烘干，過篩（40目篩子），去掉粗顆粒 。
（2）準備好非耕作層的不含腐植質的瘦黃土或紅土，浸泡洗滌數次，直至ph為中性，然后烘干，碾碎，過篩（100目篩子），去掉粗顆粒 。
（3）將沙和土按照2：1的比例混合，裝入試管或者是安瓿管中，塞好棉塞，在1212℃的環境下滅菌30分鐘左右 。
（4）將菌種在斜面培養基中培養 ， 得到健壯的菌體，然后向斜面培養物中注入3-5ml無菌水，洗下細胞或孢子制成菌懸液 。
（5）使用滅菌過的吸管吸取菌懸液，然后均勻滴入沙土管中（0.2-0.5ml/管） 。如果是放線菌或霉菌 ， 可以直接挑取孢子拌入沙土管中 。
（6）真空抽去沙土管中的水分 。
（7）將沙土管用火焰熔封，然后存放在低溫(4-6℃)干燥處保藏，或者是將沙土管用牛皮紙或塑料紙包好，放置在干燥器內保存 。保存期間，每隔6個月左右檢查一次菌種存活性 。
4、濾紙保藏法
（1）準備好濾紙條（0.5×1.2cm），安瓿管（0.6×8cm），然后每個安瓿管放置1-2張濾紙條，塞上棉塞，在0.1MPa，121℃的環境下滅菌30分鐘左右 。
（2）將菌種在適合的斜面培養基上培養，得到健壯的菌體 。
（3）在滅菌培養皿中滴加1-2ml的滅菌脫脂牛乳，并取數環菌苔在牛乳內混合均勻，制成濃懸液，然后使用鑷子從安瓿管中取出濾紙條，浸入菌懸液中，吸飽后，放回安瓿管中，塞上棉塞 。
（4）將安瓿管放入干燥器中（內有五氧化二磷作吸水劑），并用真空泵抽氣至干 。
（5）將棉花塞入管內，用火焰熔封，然后放置在低溫環境下保存 。
5、甘油管保存法
（1）準備好80%的甘油，然后進行高壓蒸汽滅菌處理 。
（2）將菌種在適合的斜面培養基上培養，并使用無菌水注入，制成成高濃度的菌懸液 。
（3）取出1ml的甘油和菌液混合均勻，讓甘油的濃度變為10-30%左右 ， 然后放置在零下70℃的環境下進行保存 。
6、冷凍干燥保存法
在低溫下快速凍結細胞，然后在真空條件下進行干燥，讓微生物的生長和酶活動停止 ， 同時為了保證細胞在冷凍和水分升華的過程中不受損害，應當使用保護劑來制備細胞細胞懸液（菌在凍結和脫水過程中起到保護作用的溶質），通過氫鍵和離子鍵對水和細胞所產生的親和力來穩定細胞成分的構型 。
二、菌種傳代操作規程
1、點燃酒精燈，在火焰旁的上方灼燒接種環 。
2、將原有的菌種斜面培養基（菌種管）和待接種的新斜面培養基（接種管）用左手的拇指、食指和中指夾?。?菌種管在前，接種管在后，然后斜持試管（45°），讓試管內斜面向上 ， 兩個試管的口子平齊 。
3、右手在火焰旁邊轉動兩管的棉塞，然后右手拿著接種環的柄端，垂直將接種環在火焰上灼燒，頂端的環必須燒紅，而且凡是接種時進入試管的部分，均應通過火焰灼燒 。
4、使用右手的小指和手掌之間以及無名指和小指之間，將兩管的棉塞拔出 ， 拿?。?然后將試管在火焰上通過 。
5、將接種環插入菌種管內，接觸無菌苔生長的培養基，待冷后，從斜面上挑取少許菌苔，然后迅速插入接種管 ， 在斜面上輕輕劃線接種（由下而上劃直線，然后由下往上劃曲線） 。
6、接種完畢后，將管口通過火焰滅菌，并將棉塞塞上 。