引物稀釋引物稀釋后放幾度 _知識經驗

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大家好,小耶來為大家解答以上的問題。引物稀釋后放幾度，引物稀釋這個很多人還不知道,現在讓我們一起來看看吧！
1、稀釋引物要達到的濃度（pmol/ul）＝母液濃度（pmol/ul）×汲取母液的體積（ul）÷（汲取母液的體積（ul）＋加水量（ul））引物一般來的時候是干粉.這種狀態能保存最長的時間.如果用的話要先離心,5分鐘（12000轉）.然后用它上面寫的nmol*1000/你的終濃度=你要加的水量溶解液有TE和dd水.TE其實就是tris鹽酸和EDTA的混合液.理論上用TE保存好,不容易降解.一般配的時候要先配成儲存液（濃度是100umol/L）,在配成使用液（濃度是10umol/L）.這樣的好處是引物不容易降解.引物忌諱反復凍溶,大家要注意.如果你都配成了使用液就應該分裝.使用液放在4度（2/3個月沒問題的）,儲存液放在-20度.引物稀釋很簡單,一般裝引物的管子上都標有引物的量如/OD,可直接往管中加360ul的無菌雙蒸水溶解就可以了,在加水之前要先高速離心管子幾分鐘,加水后要高速漩渦混勻幾分鐘就可以用了,此時的儲存濃度是10umol/L,如果體系是20ul一般加1ul引物(引物的使用濃度最大為10pmol/ul,但一般在0.5-5pmol/ul即可 ).引物的濃度設定,不同的人有不同習慣,有的喜歡稀釋成100uM的,有的習慣于稀釋成20uM,也有的稀釋成10uM的.建議稀釋成20uM的濃度,因為如果你稀釋成100uM,當你所做PCR的體系不是很大的時候,體積太小了引物就不好加,容易產生誤差；如果是稀釋成10uM,引物濃度過低,容易降解.不過不管你稀釋成多大濃度的,最好分裝保存,免得反復凍融容易降解. 。
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