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核酸檢測的檢測方式

生活百科核酸

【核酸檢測的檢測方式】1、核酸序列依賴性擴增法，NASBA是由一對引物介導的、連續均一的、體外特異性核苷酸序列等溫擴增RNA的新技術 。反應在 42 ℃進行 ,可在2h內將RNA模板擴增約109倍 。NASBA原理是提取病毒RNA,加入AMV逆轉錄酶、RNA酶H、T7RNA聚合酶和引物進行擴增 。整個反應分非循環相和循環相:在非循環相中,引物I與模板RNA退火后在AMV逆轉錄酶的作用下合成cDNA,形成RNA:DNA雜合體,隨即RNaseH降解RNA,引物Ⅱ與cDNA 退火, 在反轉錄酶作用下合成第2條DNA互補鏈 。雙鏈DNA可在T7RNA聚合酶的作用下,經其啟動子序列起動而轉錄RNA ， RNA又可在反轉錄酶的作用下反轉錄成DNA ， 進入循環相,對模板進行大量擴增 。
2、轉錄介導的擴增技術，TMA技術原理與NASBA基本一致，略有不同之處是TMA利用的是MMLV逆轉錄酶及T7 RNA聚合酶兩種酶 ， MMLV逆轉錄酶既有逆轉錄酶的活性又具有RNA酶H活性 。反應在41.5 ℃進行,可在1h內將RNA模板擴增約109倍 。
3、連接酶酶促鏈式反應(LCR)，LCR是基于靶分子依賴的寡核苷酸探針相互連接的一種探針擴增技術，是繼PCR后新發展的一種較有前景的體外擴增技術 。它的原理就是由2段寡核苷酸單鏈DNA探針與目標序列雜交,當該2段DNA探針與沒有發生突變的模板褪火后,如果2探針是緊鄰的,中間沒有核苷酸間隔,則可在連接酶作用下連接起來,連接以后的新鏈又可以作為模板,引導下一周期的連接產生新的子鏈 。若連接區段發生核苷酸的堿基突變,則連接反應不能發生,擴增反應終止 。