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分光光度計的使用方法指導( 二 )

知識百科


雙光束分光光度計是指從光源中發出的光經過單色器后被一個旋轉的扇形反射鏡（即切光器）分為強度相等的兩束光 ， 分別通過參比溶液和樣品溶液 。 利用另一個與前一個切光器同步的切光器 ， 使兩束光在不同時間交替地照在同一個檢測器上 ， 通過一個同步信號發生器對來自兩個光束的信號加以比較 ， 并將兩信號的比值經對數變換后轉換為相應的吸光度值 。
常用的雙光束紫外一可見分光光度計有710型、730型、760MC型、760CRT型、日本島津UV一210型等 。 這類儀器的特點是：能連續改變波長 ， 自動地比較樣品及參比溶液的透光強度 ， 自動消除光源強度變化所引起的誤差 。 對于必須在較寬的波長范圍內獲得復雜的吸收光譜曲線的分析 ， 此類儀器極為合適 。
雙波長分光光度計與單波長分光光度計的主要區別在于采用雙單色器 ， 以同時得到兩束波長不同的單色光 。 光源發出的光分成兩束 ， 分別經兩個可以自由轉動的光柵單色器 ， 得到兩束具有不同波長A1和A2的單色光 。 借切光器 ， 使兩束光以一定的時間問隔交替照射到裝有試液的吸收池上 ， 由檢測器顯示出試液在波長λ1和λ2的透射比差值△r或吸光度差值△A ， 則
△A＝Aλ1－Aλ2＝﹙Eλ1－Eλ2）bc
由式可知 ， △A與吸光物質c成正比 。 這就是雙波長分光光度進行定量分析的理論根據 。
常用的雙光束分光光度計有國產wFZ800S、日本島津UV一300、UV一365等 。
這類儀器的特點是：不用參比溶液 ， 只用一個待測溶液 ， 因此可以消除背景吸收干擾 ， 包括待測溶液與參比溶液組成的不同及吸收液厚度的差異的影響 ， 提高了測量的準確度 。 它特別適合混合物和渾濁樣品的定量分析 ， 可進行導數光譜分析等 。 其不足之處是價格昂貴 。