癌癥|《自然·癌癥》：南京鼓樓醫院團隊發現肝癌發病新機制( 二 ) 團隊|新機制|研究人員|基因|發

隨后的細胞實驗發現，敲除hnRNP K ，能減弱肝癌細胞增殖和遷移侵襲的能力，并且還能消除lnc-CTHCC過表達對肝癌細胞增殖和轉移的促進作用；而過表達hnRNP K ，則能挽救lnc-CTHCC敲除導致的肝癌細胞增殖和遷移能力的下降。另外， hnRNP K還能調節腫瘤轉移相關標志物的表達。由此可見，lnc-CTHCC通過直接結合hnRNP K參與肝癌的發生和轉移。

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▲ 免疫沉淀顯示lnc-CTHCC和hnRNP K結合（圖d）；hnRNP K在肝癌組織中表達升高（圖i）；hnRNP K高表達與肝癌患者的預后降低顯著相關（圖m）；敲除hnRNP K后，肝癌細胞增殖（圖n和圖o）和遷移侵襲（圖p）的能力減弱；hnRNP K過表達挽救了lnc-CTHCC敲除對肝癌細胞增殖和轉移的抑制作用（圖q）；hnRNP K敲除抵消了lnc-CTHCC過表達對肝癌細胞增殖和轉移的促進作用（圖r）
為了進一步確定lnc-CTHCC在hnRNP K后的下游機制，研究人員檢測了lnc-CTHCC在肝癌中調控的信號通路，發現與細胞生長相關的Hippo信號通路，在lnc-CTHCC敲除的肝癌組織中明顯富集，其中，通路的核心蛋白YAP1水平顯著降低。
染色質免疫沉淀發現hnRNP K與YAP1啟動子區域結合，熒光素酶報告基因實驗證明敲除hnRNP K能降低YAP1的轉錄活性。這些結果表明，在與hnRNP K直接結合后， lnc-CTHCC募集hnRNP K至YAP1啟動子區域，促進YAP1轉錄。
YAP1作為一種癌基因，在多種癌癥中表達上調，能促進癌癥細胞的增殖和存活[6] 。那么， lnc-CTHCC是否是通過YAP1來促進肝癌的發生呢？
為了確定YAP1在肝癌中的生物學功能，研究人員驗證了YAP1在肝癌中的表達水平：YAP1在肝癌組織中高表達，高YAP1與總生存率降低顯著相關。敲除YAP1 ，肝癌細胞增殖和遷移侵襲能力減弱，并且能消除lnc-CTHCC過表達對肝癌細胞增殖和轉移的增強效應。在小鼠肝癌模型中， YAP1基因敲除能顯著抑制lnc-CTHCC誘導的腫瘤生長。這些結果表明，lnc-CTHCC依賴于YAP1促進肝癌細胞的惡性表型。

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▲ lnc-CTHCC敲除后， YAP1表達降低（圖f）；hnRNP K與YAP1啟動子區域結合（圖k）；高YAP1與肝癌總生存率降低顯著相關（圖L）；敲除YAP1 ，肝癌細胞增殖減弱（圖B），并且能消除lnc-CTHCC過表達對肝癌細胞增殖的促進效應（圖D）；在肝癌小鼠中，敲除YAP1抑制lnc-CTHCC誘導的腫瘤生長（圖G）。
【癌癥|《自然·癌癥》：南京鼓樓醫院團隊發現肝癌發病新機制】
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▲ m6A修飾的功能（黃框所示為本文涉及的三個相關蛋白）
研究人員發現，作為一種lncRNA ，在肝癌中，lnc-CTHCC的m6A修飾水平顯著上升。敲除或過表達METTL3 ，能相應地下調或上調lnc-CTHCC表達，進而抑制或促進肝癌細胞的惡行生物學行為。因此， METTL3通過增加對lnc-CTHCC的m6A修飾，上調lnc-CTHCC的表達，發揮對肝癌細胞的調節功能。

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▲ 本文機制示意圖（Normal：正常組織；HCC：肝癌組織）
本研究中，研究人員先是通過生信分析，發掘和鑒定了一個新的CT基因， lnc-CTHCC；爾后，通過一系列的實驗，探索和驗證了lnc-CTHCC在METTL3–IGF2BP1/IGF2BP3–lnc-CTHCC–hnRNP K–YAP1軸中發揮的關鍵作用。整個過程絲絲入扣，創新性地提出CT-lncRNA是驅動肝癌發生的新靶標，有望為肝癌的個性化治療提供新思路。