浙大和藥大團隊發現腸癌細胞竟會“丟棄”抑癌因子( 二 ) _健康小知識

他們還發現circRHOBTB3的結合蛋白是ENO1和ENO2 。也就是說， circRHOBTB3可能通過與ENO1和ENO2等代謝酶相互作用，調節細胞內ROS水平，抑制腫瘤細胞增殖和EMT 。
為了驗證circRHOBTB3在體內的功能，研究人員將過表達circRHOBTB3的HCT116細胞（CRC細胞系）皮下注射到裸鼠體內，構建了異種移植瘤模型。研究發現，與不表達circRHOBTB3的對照（EV）組相比， circRHOBTB3過表達（circRHOBTB3-OE）組的腫瘤體積和重量都顯著更小，且細胞增殖能力也更弱（圖4A、B、C）。
而當他們在裸鼠脾臟接種實驗中觀察肝轉移表型時發現， circRHOBTB3-OE組肝轉移灶少于EV組（圖4D、E）。更為有趣的是， circRHOBTB3可以在異種移植瘤小鼠模型的血漿和尿液中檢測到，而在野生型小鼠的血漿和尿液中則沒有。此外， circRHOBTB3-OE組的血漿中circRHOBTB3的水平高于EV組（圖4F、G）。

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圖4circRHOBTB3功能的體內驗證實驗
根據這些數據，研究者們推測CRC細胞必須通過外泌體分泌抑制腫瘤的circRHOBTB3來維持腫瘤侵襲和轉移的特征，換言之， CRC細胞有特殊的“排毒”機制。
在隨后的研究中，研究人員發現了circRHOBTB3的環化機制，還發現circRHOBTB3本身的順式元件（141–240nt ， 141-165nt ， 216-240nt）可以調節circRHOBTB3通過外泌體的分泌過程（圖5）。

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圖5轉染了截斷的circRHOBTB3載體的細胞中circRHOBTB3外泌體分泌豐度
之前已經有研究發現， ESCRT-II亞復合物作為一種RNA結合復合物，可以將RNA分選至外泌體[8]中。在該文研究中，他們發現SNF8可以結合到circRHOBTB3的141-240nt區域，促進circRHOBTB3被分選至外泌體并分泌到胞外。他們將這個過程被定義為“腫瘤外泌體逃逸機制”（圖6）。
圖6SNF8敲低實驗以及外源的RIP實驗
受上述研究結果啟發，研究人員設計了二代ASOs ，以增加circRHOBTB3的環化并減少分泌，這有望成為一種新的癌癥治療策略。
研究人員設計了三種二代ASOs：一個靶向負環化的元件（ASO-cir：266-290nt）和兩個外泌體分泌的元件（ASO-exo1：141-165nt ， ASO-exo2：216-240nt）（圖7）。
通過實驗他們發現， ASO-cir確實能增加circRHOBTB3的環化，但circRHOBTB3的分泌卻會同時增加；而ASO-exo1和ASO-exo2中，僅ASO-exo2（以下簡稱ASO-exo）既增加circRHOBTB3的胞內水平，又阻斷circRHOBTB3外泌體的分泌。因此，研究者們考慮進一步使用ASO-cir和ASO-exo ，研究二者聯合治療對結直腸癌的特異性和抗腫瘤效果。

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圖7二代ASOs及其作用機制
研究人員驗證了ASOs的聯合用藥的確比ASO-cir和ASO-exo的單獨用藥能產生更多的胞內circRHOBTB3 ，且小鼠實驗的結果符合預期：ASO-cir聯合ASO-exo確實顯著提高了脾臟原發病灶中circRHOBTB3的表達，還可顯著減少腫瘤惡病質，且能控制轉移（圖8）。

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【浙大和藥大團隊發現腸癌細胞竟會“丟棄”抑癌因子】圖8ASOs體外及體內實驗