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分光光度計操作規程與光譜分析技術

知識百科

一、儀器設備
721、723可見分光光度計、752紫外可見分光光度計、UV－2401PC紫外可見分光光度計、UV－3150PC紫外可見近紅外分光光度計、RF-5301PC熒光分光光度計、比色液及標準溶液、濾紙等 。
二、儀器結構

分光光度計操作規程與光譜分析技術

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分光光度計操作規程與光譜分析技術

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三、原 理
光譜儀器是一種簡單易用的分光光度法測定通用儀器，不同型號的機器測定的波長范圍不同，可以根據自己的需要選擇要使用的儀器 。
不同型號的光譜儀器的構造有很大的差別，但是其基本原理是相同的 。 根據溶液中各種成分對透過光的吸光度不同，在一定范圍內，吸光值（或者透過率）與溶質的濃度成正比（玻爾定律） 。 通過準確濃度的標準品對應其吸光值（透過率）作圖，我們就可以得到一條標準曲線 。 測定未知濃度的待測樣品的吸光值（透過率），與標準曲線相比較就可以得到其濃度 。
四、適用范圍
可廣泛用于醫學衛生、臨床檢測、生物化學、石油化工、環保檢測、質量控制等方面作定量、定性分析 。
具體到我們實驗室，可以對多糖、蛋白、核酸等物質進行定性、定量測量 。 同時UV－3150PC紫外可見近紅外分光光度計還可以測量近紅外區的固體、液體樣品的吸收光譜，RF-5301PC熒光分光光度計可以測定熒光物質的發光強度光譜，同時他們自帶的軟件可以方便的進行數據處理與分析 。
五、操作步驟
我們以UV－3150PC紫外可見近紅外分光光度計為例講述光譜儀器的性能和操作方法 。
1、插上電源，打開光度計前面的電源開關 。
2、雙擊計算機桌面UVProbe圖標，打開UVProbe軟件，點擊UVProbe中“Connect”圖標聯機，出現自檢畫面 。
3、如自檢完全部綠燈亮，則點擊“OK”進入系統 。 若出現紅燈亮，可關掉光度計重新連接，若仍未通過自檢，應立即報告儀器負責老師 。
4、完全通過并進入系統，出現UVProbe菜單欄和工具欄 。 UVProbe有四大主要模塊，包括光譜掃描模塊、光度測量模塊、時間掃描模塊和報告生成器 。 每種模式都可以直接點擊后面的方法設定按鈕設置方法 。
5、點下光譜掃描圖標，出現光譜掃描界面 。
6、點擊方法按鈕，出現方法設置對話框 。 在此可以設置掃描波長范圍，儀器的最大范圍為3200～190nm 。 可以設置掃描速度，一般可選中速（Medium）或快速（Fast）進行掃描 。 采樣間隔表示光度計每隔多少nm讀一個吸光度值，如沒有特殊要求，選擇自動即可 。 可選擇是否重復掃描曲線，若重復則設置重復次數和間隔時間 。
7、點擊“Sample Preparation”輸入樣品信息 。 包括樣品的質量、體積、稀釋倍數和測量光程等 。 也可以輸入樣品的其他信息 。
8、點擊“Instrument Parameters（儀器參數）”設置測量方式和儀器的一些參數 。 在測量模式中可選擇“Transmittance（透過率）”、“Absorbance（吸光度）”、“Energy（能量）”和“Reflectance（反射）”，其中Reflectance一般用積分球測定固體樣品時使用 。 狹縫設置在3200～800nm下設為5nm，在800～190nm設為2nm 。 若包括這兩個范圍的波長如1500～500nm則選擇狹縫為5nm 。
9、換燈和檢測器可根據所測樣品進行設置，換燈在393～282nm范圍內任意值均可，換檢測器在895～750nm范圍內任設一個值即可 。 但換燈和檢測器由于儀器進行機械的移動，會造成信號波動較大，稱儀器噪音大，此時所得掃描曲線誤差較大，所以所設波長應該避免在樣品吸收峰位置以免影響測定值 。