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請教梯度PCR設置梯度問題

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請教梯度PCR設置梯度問題

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【請教梯度PCR設置梯度問題】梯度PCR是為第一次使用某條引物，為了摸索最佳退火條件設定，拿到引物時，會得到建議的Tm值 ， 由于兩條引物不同，可算出一個退火溫度，但這個退火溫度不一定是最佳反應條件，因此可以設定退火的梯度，最常用的為10℃，這樣每一個反應都有一個退火溫度，最后電泳時，可以觀察到在哪一個退火溫度下，PCR產物產量和特異性都有保證，這樣后面就可以選這個溫度進行試驗，但是對于已經有最佳條件的引物，或反應體系，不需要做梯度PCR 。