胰腺導管腺癌細胞學樣本進行NGS檢測可行嗎？( 三 ) _健康小知識

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近年來，胰腺癌發病機制和生物學研究領域取得了重大進展。幾項研究表明，基因突變情況影響腫瘤行為及對靶向基因突變、DNA修復缺陷、腫瘤微環境和免疫檢查點的治療的敏感性。目前，臨床實踐中并沒有對所有PDAC患者系統地進行分子檢測，導致能夠指導個體化治療方案的生物標志物被忽視。
本研究旨在評估臨床實踐中使用NGS對可切除和不可切除PDAC患者進行腫瘤分子檢測的可行性。本研究使用161基因panel成功檢測了FFPE組織樣本和細胞學涂片，支持NGS檢測在臨床中的應用。 NGS檢測的周轉時間短至5個工作日。
NGS具有前景，本研究中3個數據集檢測成功率較高（可切除PDACFFPE組織， 90%；可切除PDAC細胞學涂片， 84%；不可切除PDAC細胞學涂片， 100%），兩種樣本間的一致性較高（FFPE組織與細胞學涂片一致性88%），變異檢出率較高，除1例樣本外，所有檢測樣本均檢出至少1個具有臨床意義的基因變異。
值得注意的是， 14%的可切除PDAC患者存在HR通路基因變異，且與相應治療組的中位DSS相比， DSS顯著改善。我們不僅觀察到BRCA1和BRCA2基因突變，還有ATM和NBN突變。幾項臨床試驗表明， DNA損傷藥物和PARP抑制劑在HR缺陷型PDAC中療效較好。因此， 2019年， NCCN指南推薦所有PDAC患者行胚系突變檢測，局部晚期或轉移性PDAC患者行腫瘤基因檢測。由于PDAC中發現的體細胞突變比例高于胚系突變，將HR相關基因突變狀態評估擴展到體細胞水平，可以識別更多能從靶向治療方案中獲益的患者。
本研究中13%的可切除PDAC患者NGS檢出CNV ，其中MYC和ERBB2頻率較高。盡管PDAC患者中擴增發生率較低，但這些變異可能與靶向治療有關。特別是， ERBB2靶向治療方案在ERBB2陽性乳腺癌和胃癌中顯示出療效，新的數據表明了其在多種癌種中的療效，包括胰腺癌。有趣的是， 2例可切除PDAC患者檢出FGFR1和FGFR4擴增，目前有臨床研究正在評估FGFR抑制劑在不同癌種中的療效。
此外，本研究表明， H&E染色的細胞學涂片為PDAC患者全面分子檢測提供了較好DNA來源，表明了不適宜手術切除的患者進行分子檢測的可能性。本研究中，不可切除PDAC的突變特征與可切除PDAC類似：兩個隊列中KRAS、TP53、CDKN2A和SMAD4突變發生率相似。此外，我們發現3/20例（15%）患者存在可治療變異：KRASp.G12C突變、ERBB2錯義突變和BRCA2無義突變。目前，針對這些變異有可及的靶向治療方案，提示不可切除PDAC患者細胞學樣本分子檢測結果可用于指導個體化治療方案。
盡管如此，胰腺癌存在高度腫瘤內異質性，不同的腫瘤亞克隆可能具有不同的分子特征。 5例患者組織和細胞學樣本分子檢測結果不一致。 4例患者僅手術組織樣本檢出低豐度突變， 1例患者僅細胞學樣本檢出低豐度TP53突變。這些差異不太可能是由于NGS檢測下限（豐度>5%）所致，因為所有不一致的樣本腫瘤細胞占比都大于20% 。分子檢測結果的差異很可能是由于PDAC腫瘤內異質性所致：細胞學樣本中的腫瘤細胞數量較少，代表的腫瘤克隆可能與更具代表性的手術樣本不同。
值得注意的是，有患者由于DNA質量和數量不足，無法進行分子檢測：福爾馬林固定時間過長會影響FFPE樣本DNA質量，應當避免。在隊列1中的4例患者，相應的細胞學樣本足以進行NGS檢測，但組織學樣本檢測失敗。
幾項研究比較了細針穿刺抽吸（FNA）與細針穿刺活檢的性能，結果相互矛盾。在我院， EUS-FNA隨后ROSE是常規進行的，因為能夠實時檢查用于診斷和后續檢測的樣本是否充足，減少了非診斷程序。此外， FNA樣本腫瘤含量通常高于細針穿刺活檢，細針活檢樣本中基質和非腫瘤成分會稀釋腫瘤比例。最后，乙醇固定可以保持DNA完整性，優于福爾馬林。