1. 首頁 > 健康養生 > >

Zell|支原體祛除劑使用攻略

進行抗生素基中懸浮沖洗法MynoxShield培養基支原體攻略實驗污染細胞Zell

支原體在自然界廣泛存在 ， 尤其可以寄生于人、哺乳動物、植物、昆蟲等物種 。
人的口腔、鼻腔、皮膚、呼吸道等均可攜帶支原體 ， 支原體可以說是無處不在 ， 在細胞實驗過程中 ， 操作稍有不慎 ， 造成細胞支原體感染的風險就大大增加 。
在細胞間里 ， 支原體對細胞培養的污染風險不容忽視 。
首先細胞感染支原體早期沒有顯著表現 。 等到實驗人員發現細胞異常了 ， 此時細胞基本已經“病入膏肓” ， 感染十分嚴重了 。
其次 ， 常規的抗生素對支原體無效 。 一旦發生污染 ， 支原體會影響細胞基因表達和營養代謝改變 ， 嚴重干擾實驗結果（包括細胞轉染和病毒包被） 。
因此 ， 支原體污染對細胞培養影響重大 ， 一定要重視起來！
1、有效去除支原體的方法
如果培養的細胞發生了支原體污染的情況 ， 我們首先建議大家丟棄被污染的細胞 ， 并進行徹底的消殺 。
如果細胞很重要 ， 不能丟棄 ， 那么推薦使用專業的支原體祛除試劑 ， 既安全 ， 又高效（畢竟甲醛熏蒸、次氯酸鈉、酒精這些東西 ， 既容易對實驗人員造成損害 ， 效率也比較低） 。
以支原體祛除劑Zell Shield?為例 ， 進行說明 。
Zell Shield?是一種復合抗生素類產品 ， 加入到細胞培養基中 ， 通過阻止支原體、真菌、霉菌、致命病菌增殖過程中DNA及蛋白的合成 ， 有效抑制微生物的增殖 ， 對大多數革蘭氏陽性和陰性細菌、霉菌、酵母、原蟲也同樣有效 。
Zell Shield?適合如下兩種情況：
1）培養的細胞面臨支原體的高污染風險 ， 尤其是取自生物有機體的原代細胞 。 這時建議在培養基中加1%的Zell Shield? 。
2）發現細胞已被支原體污染 ， 而不愿意丟棄（如已轉染 ， 已經體外刺激或已費力擴增的細胞） ， 希望繼續培養 ， 這時可采用下面的“懸浮沖洗法”進行支原體的祛除 。
對于非常珍貴的細胞或不易獲得的生物樣品（如細胞種子） ， 發現有支原體污染 ， 希望挽救 。 這時我們推薦使用MB公司的Mynox?或Mynox Gold?進行支原體的祛除 。
Zell Shield?的用法如下：
1）常規使用
Zell Shield?為-18℃避光保存 。 使用前 ， 建議融化分裝 。 避免反復凍融 。
Zell Shield?按1:100直接加入到新鮮配制的培養基 。 例如：500ml培養基中添加5ml Zell Shield? ， 混合后在2~8℃保存可至少4周 。 37℃進行培養時 ， 最多7天需要更換新的含有Zell Shield?的培養基 ， 以獲得最大的保護 。
說明：Zell Shield?在培養基過濾前或過濾后加均可 。 如果培養基尚未無菌過濾 ， 可在加入Zellshield?后再進行無菌過濾 。
一般情況下 ， 使用了Zell Shield? ， 就不必再額外添加雙抗了 。
【Zell|支原體祛除劑使用攻略】2）懸浮沖洗法（適合已有支原體污染的細胞）
約98％的支原體存在于細胞表面和細胞間隙 。 細胞傳代前 ， 用干凈的PBS懸浮沖洗3次 ， 就能把70%以上的支原體沖洗下來 ， 再通過低速離心 ， 棄上清 ， 即可祛除大部分支原體（離心后細胞沉淀 ， 沖洗下來的支原體在上清中） 。 再繼續用含1%Zell Shield?的培養基持續培養 。 細胞再連續傳代3次 ， 每次都用PBS對細胞進行懸浮沖洗 ， 并用含1%Zell Shield?的培養基培養（見下圖） ， 即可逐漸祛除細胞中的支原體 。
另外 ， 需要說明的是ZellShield?含有氟喹諾酮類藥物 ， 可與其他抗生素聯合使用 ， 作為耐藥性標記 。 其他抗生素成分不用作耐藥性標記 。
想要了解更多 ， 歡迎訪問官網：www.dyshengwu.com