1．抽取正常人靜脈血加到肝素抗凝管中 ， 加等量含5～10IU/ml肝素的無血清緩沖液懸浮細胞 。 將細胞懸液小心加在與血液等量的淋巴細胞分離液上 ， 室溫中 ， 水平離心500×g 20分鐘 。 此時離心管中形成5層：最上面是血漿 ， 血漿層和淋巴細胞分離液之間是PBMC ， 淋巴細胞分離液層和最下面的紅細胞層之間是粒細胞層 ， 又成為棕黃層 。
2．吸去最上層的血漿 ， 收集血漿層和淋巴細胞分離液交界面的單個核細胞 ， 盡量全部吸出PBMC 。 加1～2倍量含5IU/ml肝素、2％滅活小牛血清的Hanks液（洗滌液） ， 混勻后離心200×g 10分鐘 ， 低速離心有利于去除細胞懸液中留存的血小板 ， 去上清液 。
3．再用同樣洗滌液洗滌細胞2次 ， 每次離心500×g 10分鐘 ， 洗去殘留的淋巴細胞分離液 。 用1％臺盼藍染色檢測細胞活力（應>95％）并計數細胞 。 再用含10％小牛血清的細胞培養液將細胞配成適當濃度 。 通常 ， 每毫升外周血可得1×106～2×106PBMC 。
分離關節滑液中的單個核細胞
1．將關節滑液置含肝素（終濃度5IU/ml）的離心管中 ， 離心1000×g 15分鐘 。
2．用含2％滅活小牛血清的Hanks液懸浮沉淀細胞并洗滌細胞1次 ， 每次離心1000×g 15分鐘 。 用含2％滅活小牛血清的Hanks液懸浮細胞至原容量 。
3．用淋巴細胞分離液分離關節滑液中的單個核細胞 ， 并用含10％小牛血清的細胞培養液將細胞配成適當濃度 。
分離組織中的單個核細胞
1．取外科分離的各種組織 ， 用含1％慶大霉素和1％小牛血清的MEM培養液洗滌組織塊 ， 洗去可能的污染物 。 將組織塊置培養皿中 ， 加入約為組織塊體積5~10倍的同樣MEM培養液 。 用無菌外科剪刀將組織塊剪碎成0.5mm3大小 。
2．將組織塊轉移到小培養瓶中 ， 靜置片刻 ， 吸去培養液 。 加入約2倍組織塊體積的、濾過除菌的酶溶液 。 37℃水浴搖床中消化1～2小時 ， 注意組織塊的消化程度 。
3．當組織塊消化分散后 ， 用手用力搖晃培養瓶3～5分鐘或用大口吸管反復吹打 ， 使細胞團進一步分散 。 加入30ml上述MEM培養液 ， 終止酶反應 。
4．讓上述懸液通過200目的金屬網或尼龍網 ， 分離單個細胞 。 用上述MEM培養液洗滌細胞3次 ， 每次離心1000×g 10分鐘 。 用1％臺盼藍染色法檢測細胞活力并計數細胞 。
5．如果細胞量較多（>107） ， 應當用上述淋巴細胞分離液分離出單個核細胞 ， 并用含10％小牛血清的細胞培養液將細胞配成適當濃度 。

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