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磁珠法提取動物組織RNA 如何判斷提取質量？

健康知識養生常識

核酸提取傳統方法傳統的提取方法主要有酚/氯仿抽提法和硅膠柱法 ， 這些傳統提取方法可從不同組織樣本中分離出DNA和RNA 。 但這些技術中包含沉淀和離心等操作步驟 ， 其所需的生物樣本量較大 ， 提取步驟較為繁雜、費時費力 ， 得率也不高 ， 難以實現自動化操作 。
另外 ， 大部分的傳統方法中還需要用到有毒化學試劑 ， 對操作人員的健康具有潛在危害 ， 因此 ， 伴隨著分子生物學以及材料學的發展 ， 采用磁珠的方法從液相系統中分離純化核酸的新方法已經崛起 。
一、磁珠法提取
（一）磁珠法提取原理：
磁珠法提取動物組織RNA 如何判斷提取質量？
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（二）傳統核酸提取法和磁珠法比較：
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二、如何評估磁珠法提取RNA的效果？
這里給出兩個評價尺度：RNA純度和RNA完整性 。
（一）RNA純度判斷
該指標通常用吸光度比值A260/A280和A260/A230來衡量 。 其中 ， A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波長 ， A280nm是蛋白和酚類物質最高吸收峰的吸收波長 ， A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長 。
純DNA的A260/A280比值為1.8 ， 純RNA為2.0 。 如果比值低 ， 表示受到蛋白（芳香族）或酚類物質的污染 ， 需要純化樣品 。 當A260/A280<1.8時 ， 溶液中蛋白或者其他有機物的污染比較明顯；當A260/A280>2.2時 ， 說明RNA已經水解成單核酸了 。
純DNA和RNA的A260/A230比值為2.5 。 若A260/A230<2.0 ， 表明樣品被碳水化合物（糖類）、鹽類或有機溶劑污染 ， 需要純化樣品 。
所以當1.8<A260/A280<2.2 ， A260/A230比值為2.5時 ， RNA純度高 。
（二）RNA完整性判斷
分離完整的RNA在基因表達分析所用的眾多技術中是必不可少的 。 Northern分析 ， cDNA文庫構建以及用于微陣列芯片分析的cDNA標記實驗（尤其在使用oligo(dT)作為引物時）均要求RNA具有高度的完整性 。
完整的總RNA在進行變性凝膠電泳時會產生清晰的28S和18SrRNA條帶（真核樣品） 。 28SrRNA條帶的強度應當大致為18SrRNA條帶的兩倍 ， 這種2:1的比率（28S：18S）是判斷RNA完整性的一個很好的指標 ， 證明所提取的RNA未降解 ， 完整性好 ， 可用于后續試驗 。
部分降解的RNA樣品電泳條帶會彌散 ， 沒有清晰的rRNA條帶 ， 或者不會出現前面提到的高質量RNA才具有的2:1比率（28S:18S） 。 完全降解的RNA會表現為在極低分子量處的彌散狀 。 電泳中加入RNA分子量標志物可以幫助確定條帶或彌散對應大小 ， 也可以幫助判斷電泳是否正確進行 。
三、凡知組織RNA提取試劑盒
（一）產品特性
磁珠法提取動物組織RNA 如何判斷提取質量？
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※RNA純度高(OD260/2801.8-2.0)；
※高收率 ， 無降解；
※無高分子量DNA污染(DNaseI處理)；
※適用多種樣本類型；
※手工操作時間短；
（二）結果展示
1、紫外分光光度計濃度測定
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2、瓊脂糖凝膠電泳圖
（三）應用范圍
純化RNA適用于RT-PCR、RNA-Seq、芯片分析、分子克隆 。 返回搜狐 ， 查看更多
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