揭示三級淋巴結構，需要哪幾個蛋白標志物？ _健康小知識

三級淋巴結構（Tertiarylymphoidstructures,TLSs）一直是免疫腫瘤學領域的一個熱門話題，它們在影響腫瘤微環境中起著至關重要的作用[1-6] 。它們常見于浸潤性癌癥中，其存在與臨床結果的改善相關。雖然TLSs作用的基礎機制尚未完全闡明，但普遍認為TLSs是抗腫瘤免疫反應的主要參與者。
TLSs的獨特之處在于它們不符合器官的經典定義。它們的結構沒有一致的組織方式，也不在預定的位置發生。 TLSs出現在組織中，其主要功能與免疫細胞（如胸腺或淋巴結）的產生無關，而是在響應慢性刺激（如感自身免疫和慢性同種異體移植排斥反應）時表現為淋巴樣新生。 TLSs是抗原呈遞和克隆分化的免疫豁免位點，支持免疫記憶[1-4] 。
由于TLSs的存在與臨床結果的改善有關，因此它們在癌癥治療后的存在或誘導可能是治療反應的寶貴預測因子。
檢測TLSs的最簡單的方法是對福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）的腫瘤組織切片進行蘇木精和曙紅（H&E）染色。 TLSs以被CD3+T細胞包圍的CD20+B細胞結構為主要特征，成熟的TLSs類似于次級淋巴器官（secondarylymphoidorgans,SLOs）中的淋巴濾泡，包括次級淋巴器官結構中發現的生發中心的致密細胞聚集體，此外還包含分化程度較低的結構，例如淋巴聚集體和沒有生發中心的淋巴濾泡。
然而， H&E和顯色IHC染色等方法從FFPE組織切片中提取的信息非常有限。通常，顯色IHC被限制在一個或兩個蛋白標記物上，這意味著無法完全檢查腫瘤微環境中細胞相互作用的全部深度和廣度。

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三級淋巴結構的組成
【揭示三級淋巴結構，需要哪幾個蛋白標志物？】多重熒光免疫組化(multipleximmunohistochemistry/Immunofluorescence,mIHC/mIF）的多光譜成像已成為免疫治療反應重要預測能力的工具。多光譜mIHC/mIF能夠更深入地探究腫瘤微環境的空間生物學，包括捕獲空間關系的細胞間相互作用[4] 。因此，開發臨床上有用的生物標志物（如TLSs）來選擇免疫治療的應答者對于推進此類治療至關重要， mIHC/mIF和空間環境對于TLSs的可靠檢測至關重要。
蘇黎世聯邦理工學院藥物科學研究所（IPW）瑞士國家科學基金會（SNSF）PRIMA小組負責人KarinaSilina博士最近的發表中，概述了她正在進行的旨在定義TLSs發展在癌癥中的生理作用和機制的研究工作。
為了研究癌癥中的TLSs發展，她使用了6個蛋白標志物7色的Opal抗體組合-CD20(B細胞)、PNAD(高內皮小靜脈)、CD3(T細胞)、DC-LAMP(抗原呈遞樹突狀細胞DCs)、CD23(生發中心細胞， GC)及CD21（濾泡樹突狀細胞）。她發現TLSs的發展以逐步的方式發生，并且從淋巴細胞開始聚集在高內皮小靜脈周圍時開始，以Peripheral-node-addressin（PNAD）表達為標志物。
在早期階段， TLSs中尚不存在濾泡樹突狀細胞（FDCs），然后出現可視化FDCs（CD21+）的集群。最后階段，可見活躍的生發中心（CD21+/CD23+）。有趣的是，在所有這些已鑒定的階段中，可以檢測到成熟抗原呈遞樹突狀細胞（DC-LAMP+）的存在。她的發現還表明， TLSs的發展在各種組織中看起來相似，包括膀胱，肺，結腸，皮膚，腎臟等等。她所使用的方法是利用mIHC/mIF來了解TLSs作為一種新型免疫治療方法的潛力。

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用mIHC/mIF進行TLSs定量和成熟度評估
越來越多的證據表明，空間生物學是理解免疫治療反應和臨床結果的關鍵，因此，開發可轉化為臨床的mIHC/mIF至關重要， TLSs等生物標志物是患者分層的寶貴信息。與H&E染色相比，上面討論的技術可獲得TLSs檢測的更高精度[1] 。正是這些功能將使研究人員能夠全面評估TLSs密度，大小和細胞含量。表征TLSs及其組成的能力是理解持續的適應性免疫反應的關鍵，它始于獲得最清晰的圖像。