細胞|JITC：香港中文大學于君團隊發現胃癌免疫治療新靶點( 二 ) 基因|組織|生存率|患者|腫瘤

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YTHDF1敲降可抑制胃癌細胞株增殖
A：western blot證實細胞株中YTHDF1基因敲降效果
B：YTHDF1基因敲降后對胃癌細胞活力的影響
C：YTHDF1基因敲降后對胃癌細胞集落形成能力的影響
以上體外實驗結果表明， YTHDF1有明顯的促癌作用。為了探索YTHDF1在體內是否也有同樣的促癌作用，研究人員分別將轉染空白質粒的MKN74細胞（MKN74-shNC）和敲降YTHDF1表達的兩個穩轉細胞系MKN74-shYTHDF1-1和MKN74-shYTHDF1-2分別接種到小鼠皮下。
結果顯示，與接種MKN74-shNC的小鼠相比，接種MKN74-shYTHDF1-1和MKN74-shYTHDF1-2的小鼠，皮下腫瘤的大小和重量均明顯減小。這一結論在接種轉染空白質粒的YTN16-sgNC細胞和YTHDF1基因敲除（YTN16-sgYTHDF1-1和YTN16-sgYTHDF1-2）細胞的小鼠中得到了進一步驗證。

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小鼠皮下成瘤實驗
D：NSG小鼠接種MKN74細胞和YTHDF1低表達細胞對皮下成瘤的影響
E：NSG小鼠接種YTN16細胞和YTHDF1低表達細胞對皮下成瘤的影響
體內外實驗均表明， YTHDF1可明顯促進胃癌細胞的增殖，為了明確其發生的相關分子機制，研究人員進一步對YTN16-sgNC細胞和YTHDF1基因敲除細胞進行了RNA測序。
分析顯示，在YTHDF1基因敲除細胞中，有575個基因表達上調， 866個基因表達下調。基因富集分析揭示了YTHDF1基因敲除細胞中免疫調節途徑基因的缺失，包括CTLA-4檢查點通路和CD209 DC通路。同時，研究人員使用KEGG數據庫進行基因富集分析時發現，在YTHDF1基因敲除細胞中JAK-STAT信號通路基因表達上調， T細胞受體信號通路基因表達下調。這些結果提示， YTHDF1可能在體內發揮免疫調節作用。
接下來，為了探索YTHDF1的促癌作用是否依賴于免疫系統，研究團隊使用了具有免疫活性的同源小鼠模型C57BL/6小鼠，在其皮下分別接種YTN16-sgNC細胞和YTHDF1基因敲除細胞。在整個持續6周的實驗過程中，接種YTN16-sgNC細胞的小鼠腫瘤持續增長，接種YTHDF1基因敲除細胞的小鼠在接種1周后皮下雖均有腫瘤長出，但接種YTN16-sgYTHDF1-1的小鼠皮下腫瘤在2周后開始逐漸縮小。這說明YTHDF1的促癌作用至少部分依賴于功能正常的免疫系統。
2周后，腫瘤體積變化情況
既然在免疫系統正常的情況下， YTHDF1基因敲除可加快小鼠皮下腫瘤的消除，研究人員猜想腫瘤中的YTHDF1是否能在體內調節抗腫瘤免疫呢？于是，他們在C57BL/6小鼠身上分別接種YTN16-sgNC細胞和YTHDF1基因敲除細胞，并在2周后收集腫瘤，通過流式細胞術檢測腫瘤微環境中的免疫細胞浸潤情況。
結果顯示，與接種YTN16-sgNC細胞相比，接種YTHDF1基因敲除細胞的小鼠腫瘤大小和重量都有明顯的減少。流式細胞儀分析顯示， YTHDF1基因敲除組的腫瘤組織中浸潤性免疫細胞（CD45+細胞）的比例明顯高于YTN16-sgNC組（P<0.05）。

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在同源小鼠模型中， YTHDF1缺失可誘導腫瘤消除并增加免疫細胞浸潤
眾所周知， T細胞（CD3+淋巴細胞）是適應性腫瘤免疫的重要組成部分，于是，研究人員進一步分析了C57BL/6小鼠腫瘤組織中T淋巴細胞的浸潤情況。結果顯示， YTHDF1基因敲除組腫瘤組織中， CD3+細胞和CD45+細胞比例顯著高于YTN16-sgNC組，且在浸潤性免疫細胞中， CD4+T細胞和CD8+T細胞數量和占比也均高于YTN16-sgNC組。