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知識科普|增生性腎小球腎炎

1系膜增生性腎小球腎炎大鼠模型一
【操作步驟】
(1)低齡SD大鼠 ， 麻醉后取胸腺 ， 剪碎并擠出胸腺細胞 。 經尼龍網過濾除去混雜的組織 ， 濾液為淋巴細胞懸液 ， 離心 ， 取沉淀用無菌PBS懸浮 ， 調細胞計數至10的11次方/ml 。
(2)雄性新西蘭兔 ， 卡介苗預致敏14d后兩側胭窩淋巴結腫大 ， 皮下多點注射抗原(大鼠胸腺細胞＋弗氏完全佐劑) ， 3周后同樣途徑再次免疫 ， 2周后再經耳緣靜脈第3次免疫 ， 1周后取血測抗體效價 ， 達到滿意效價后頸動脈放血 ， 收集血清 ， 56℃、30min滅活補體 ， 大鼠肝粉吸附后備用 。
(3)用正常低齡大鼠胸腺冰凍片 ， 抗血清稀釋度1：20～1：1000 PAP法免疫組化測定抗體效價 ， 用正常兔血清(1：40)作對照 。 雄性SD大鼠150g左右 ， 尾靜脈注射抗血清 ， 每周1次 ， 連續4周 。 取腎臟作相應檢查 。
【結果分析】
Thy-1抗原為大鼠類胸腺細胞表面的糖蛋白 ， 它同時存在于大鼠腎小球系膜細胞表面 ， 應用Thy-1抗原可誘發腎小球系膜細胞病變 。
大鼠經一次性注射抗Thy-1抗體后 ， 30min系膜細胞即已發生變性 ， 胞漿發黑 ， 細胞皺縮；2h后大部分系膜細胞溶解 ， 但內皮細胞及腎小球基底膜(GBM)常完整無損；24h后溶解的系膜區可呈瘤樣擴張 ， 伴中性粒細胞、血小板及纖維蛋白的聚集；2～4d中性粒細胞浸潤漸漸消失 ， 取而代之為單核細胞浸潤為主 ， 并開始出現系膜細胞增生；
約8d左右可見系膜細胞及基質呈節段性增生 ， 單核細胞浸潤明顯減少；18d出現血管重建 ， 白細胞浸潤消失 ， 可見系膜溶解瘤樣損傷的迅速恢復；30～45d后腎小球結構已基本恢復正常 ， 但可伴有局灶節段性腎小球硬化 ， 有時可見膠原纖維殘留的局灶性系膜增生現象 。 病變4d左右可出現一過性的蛋白尿高峰 ， 其后逐漸減少 ， 約3周左右蛋白尿消失 。
抗Thy-1抗體腎炎模型的特點如下：
【知識科普|增生性腎小球腎炎】(1)受試大鼠僅有異體抗體相 ， 即表現為注射異體抗Thy-1抗體后 ， 產生系膜溶解及迅速的修復過程 ， 病變呈一過性；
(2)系膜細胞損傷過程為補體依賴性 ， 用蛇毒消除補體后 ， 不影響抗Thy-1抗體與系膜細胞結合 ， 但可減輕和阻止系膜細胞損傷和溶解過程；
(3)病變過程有白細胞、血小板聚集的炎癥反應；
(4)修復過程迅速 ， 30～45d內病變幾乎完全修復 ， 說明系膜細胞有較強的修復能力和血管重建能力 。
2系膜增生性腎小球腎炎大鼠模型二
【操作步驟】
(1)取成年BALB/c雄性小鼠10只 ， 消毒眼眶 ， 摘除眼球 ， 取血置于消毒玻璃試管內 ， 常溫待血凝后 ， 2000～3000轉/分離心10min ， 取血清 ， 于－20℃保存 。 BALB/c小鼠血清IgG提取采用飽和硫酸銨沉淀法 。 應用Sephadex G25柱脫鹽及7％聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測IgG 。 取BALB/c小鼠血清提取的IgG 0.5mg加等體積的弗氏完全佐劑 ， 充分混勻成乳膠狀 ， 于成年 Wistar大鼠(180～200g)兩后腳掌及背部皮下注射 。
(2)取免疫2周的Wistar雄性大鼠 ， 用10％水合氯醛麻醉(每只0.3～0.4ml) ， 舌下靜脈注射單抗1-22-3500μg(生理鹽水溶解 ， 1mg/ml ， 單克隆抗體1-22-3由日本Niigata大學腎臟病研究中心提供) 。 將動物分別置于代謝籠中 ， 于靜脈注射后 ， 1、2、3、4、5、6、7、9、11、13、15d收集大鼠24h尿液(室溫10℃左右 ， 不加防腐劑) 。 盡快用磺柳酸法進行尿蛋白定量測定 。 在靜脈注射單抗后第2d、6d取材進行病理觀察 。
【結果分析】
靜脈注射單抗后 ， 迅速出現一過性大量的蛋白尿 ， 第6d出現高峰 ， 以后逐漸下降 。 病理變化包括：