經驗分享：注意！質粒中的內毒素，或可影響細胞轉染效率！ _健康小知識

轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法中脂質體轉染方法較為常用；生物介導方法現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。

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什么是內毒素？
細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁上的一種脂多糖（LipopolySaccharide,LPS）和蛋白的復合物，當細菌裂解時便會大量釋放出來。內毒素單位為EU 。
內毒素對試驗的影響
內毒素存在極大程度地影響轉染效率。同時內毒素還可能激活免疫細胞的非特異反應，造成實驗中的假陽性。因此，為了保證高轉染率和轉染細胞高存活率，必須從質粒制備的過程中將內毒素去除。
內毒素和質粒的關系
由于內毒素兩親性和負電荷性，性質類似于DNA ，因此在質粒純化中會伴隨質粒一同被純化出來。質粒中內毒素含量的高低常用EU/μg質粒表示。
按照EU/μg大小，質粒被分為三個級別：測序級別（>50EU/μg）、轉染級別(<50EU/μg)和無內毒素級別(<0.1EU/μg) 。

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再次強調
當你提取的質粒DNA是為了轉染原代細胞、懸浮細胞或者敏感細胞；進行基因沉默研究、細胞注射顯微操作；進行基因治療或者DNA疫苗等要求極為嚴格的實驗，就應該考慮Endotoxin-Free的質粒。
2017年3月，張鋒課題組在《NatureProtocols》發表的《Genome-scaleCRISPR-Cas9knockoutandtranscriptionalactivationscreening》中， Endotoxin-Free的質粒獲得被列為CriticalStep ，同時推薦該廠家的NucleoBondEndotoxinFreePlasmidDNAkit ，可避免病毒包裝和細胞培養過程中減少了內毒素殘留的影響。

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NucleoBondEndotoxinFreePlasmidDNAkit
來自有著近百年濾紙技術和近60年色譜技術的德國MN（MACHEREY-NAGEL）。采用陰離子交換樹脂技術作為質粒純化的原理。
推薦原因：
內毒素低于0.05EU/ug
Endotoxin-Free系列設計有**的Endo-EF內毒素去除試劑，有效去除內毒素，避免了長時間的氯化銫超速離心步驟，也不需要冰上孵育30min ，內毒素含量遠遠低于市面上同類產品。
得率高
采用MAE作為陰離子交換樹脂填料，與傳統的DEAE材料（二乙氨乙基）相比，親水性質的羥基（-OH）替代了疏水性質的甲基（-CH3），更小的分子量可以使每克樹脂可結合更多的質粒DNA ，得率可達1000μg 。
DEAE:Diethylaminoethyl（二乙氨乙基）

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MAE:Methylaminoethanol（甲基乙醇胺）

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超螺旋結構保護好
濾紙和色譜技術相結合誕生的NucleoBondXtraColumn實現裂解液重力過濾和過柱，無需離心，減少了離心力對質粒超螺旋結構的影響。

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裂解后的質粒狀態（泳道1）和洗脫下來的質粒狀態（泳道4）是保持一致的。
抽提速度更快
NucleoBondXtraColumn實現過濾和質粒結合樹脂的步驟合二為一，避免較長時間的離心。 NucleoBondFinalizer實現過柱后的溶液通過一個針管過濾器，質粒就可以吸附在過濾器中的介質上，僅需要5min即可以完成之前長達1h的異丙醇質粒離心沉淀操作！

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來源基因科技有限公司返回搜狐，查看更多