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Hydromer親水涂層具有降低血栓形成性、細胞增殖和蛋白質吸附性( 三 )

健康知識養生常識


5、細胞增殖試驗
在培養3-7天后 ， 使用Promega（威斯康星州麥迪遜）的CellTitter96定量試劑盒評估細胞活力和增殖 。 簡單地說 ， MTS四唑化合物被細胞生物誘導成可溶于組織培養基中的彩色甲瓚產物 。 加入培養細胞1-4h后 ， 在492nm處可讀取吸光度 。 所產生的甲瓚的數量與培養物中活細胞的數量成正比 。 因為我們使用這種方法來分析生長了3天或更多時間的細胞 ， 我們的數據更多的是增殖的跡象 ， 而不是粘附 。
然而 ， 我們確實在播種后5-8小時的顯微鏡下檢查了表面 。 用分子探針（Eugene ， OR）的活/死活生存能力染色試劑盒對細胞進行染色后 ， 也拍攝了熒光照片 。 通過這種實驗 ， 由于鈣黃綠素在細胞內的保留 ， 活細胞呈綠色 。 由于核酸的溴化乙錠染色 ， 死亡細胞呈紅色 。 所有的照片都代表了所分析的整個表面積 。
6、使用聚氨酯管進行的全血研究
短期研究：未涂涂層和DualityTMT8涂層聚氨酯管（#2363-80A球烷 ， 3mmID ， 4mmOD）切成2cm的切片 ， 充滿檸檬酸人全血 ， 在室溫下孵育3小時 。 然后 ， 如前所述 ， 對這些管腔進行免疫組化處理 。
長期研究：聚氨酯管被切割成18厘米的部分 ， 并連接到一個蠕動泵（Brandel型號PP-120 ， 蓋瑟斯堡 ， MD） 。 檸檬酸人全血（30mL）在室溫下以2mL/min的流速循環8小時 ， 然后將試管置于48℃過夜 。 第二天 ， 取出血液 ， 檢查溶血情況（合成血漿的A540nm） ， 然后用新鮮血液代替 。 這個過程又重復了11天 。 用考馬斯亮藍染色后 ， 在顯微鏡下觀察各試管腔內的細胞、血小板和蛋白粘附情況 。 蛋白質測量是使用布拉德福德蛋白試劑完成的 ， 這是一種基于考馬斯亮染料與蛋白質相互作用后吸光度變化的分析 。 為了估計與我們的配方接觸導致的紅色溶血程度 ， 我們從檸檬酸人全血中獲得血漿分數 ， 并測量了540nm處稀釋的吸光度 ， 這是血紅蛋白的吸收最大值 。 然而 ， 這只能給出溶血的估計 。
7、結果
Hydromer親水涂層具有降低血栓形成性、細胞增殖和蛋白質吸附性
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圖1
圖1：T8B涂層不銹鋼的顯微鏡檢查 。 來自富血小板血漿的血小板和細胞被粘附在未涂層的(A)和雙相t8b涂層的(B)醫用級不銹鋼上 ， 如“材料和方法”所述 。 不銹鋼切片用考馬斯亮藍染色 ， 并使用VHX-600型顯微鏡的3100至31000透鏡進行檢查 。
圖1(A)顯示了血小板、紅細胞和白細胞對未涂層電拋光醫用級不銹鋼的粘附 。 在未涂覆的底物表面可以觀察到大量的血小板和紅細胞 。 在表面檢測到白細胞 ， 盡管它們的識別很困難 ， 可能是因為它們不能很好地粘附在電拋光不銹鋼上 。 相比之下 ， 在dualitytmt8b涂層的不銹鋼表面上 ， 很少能檢測到血小板、白細胞和紅細胞[圖1(B)] 。 為了確認顯微鏡結果 ， 我們使用使用CD41抗體的免疫組化方法來檢測粘附血小板的存在 。
Hydromer親水涂層具有降低血栓形成性、細胞增殖和蛋白質吸附性
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圖2
圖2：醫用級不銹鋼上的血小板附著力 。 將血小板粘附在涂有對偶T8B的單個不銹鋼切片上 ， 并使用小鼠抗人CD41按照“材料和方法”中所述進行分析 。 數據被描述為控制值歸一化的個別值 ， 并來自三個獨立的實驗 。 在分析前 ， 從所有原始數據中減去非免疫小鼠IgG的對照值 。 兩組間的統計學比較采用非配對t檢驗 ， p＜0.05接受有統計學意義 。
圖2所示的數據清楚地顯示了[血小板粘附降低了85% ， 這具有統計學意義（p＜0.0001） 。 同樣 ， 該方法被用于評估特定血細胞（白細胞）對未涂層和dualitytmt8b涂層電拋光不銹鋼的粘附性 。 在這些分析中 ， 我們使用了針對細胞表面抗原的特異性抗體 。