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Hydromer親水涂層具有降低血栓形成性、細胞增殖和蛋白質吸附性( 四 )

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Hydromer親水涂層具有降低血栓形成性、細胞增殖和蛋白質吸附性
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圖3
圖3：未涂覆和雙相t8b涂層電拋光不銹鋼上的血細胞的免疫組化分析 。 從檸檬酸鹽的人全血中制備的富血小板血漿在室溫下在不銹鋼表面孵育3小時 。 紅細胞和白細胞的方法和檢測是按照“材料和方法”中所述 ， 使用針對各種細胞表面蛋白的特異性抗體來確定的 。
如圖3所示 ， 使用該方法很容易檢測到粒細胞（CD15）和紅細胞（CD235） ， 而淋巴細胞（CD18）處于或低于檢測限 。 粒細胞和紅細胞在t8b涂層不銹鋼上的粘附率分別降低了86%和60% 。 同時 ， 我們還檢測了HUVEC細胞對電拋光不銹鋼的增殖情況 。 暴露于細胞3天后 ， 將不銹鋼切片用PBS沖洗 ， 并放入含有培養基的新板的孔中 。 加入細胞增殖試劑（50lL） ， 在378C下3h后分析平板 。
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圖4
圖4.人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）在未涂布和雙T8B涂層電拋光不銹鋼上的增殖情況 。 HUVEC被接種到12孔板中 ， 該板上包含未涂層(B)或涂有t8b涂層配方(C).培養3天后 ， 取出切片 ， 沖洗 ， 然后與1mL培養基一起放入12孔板的新孔中 。 加入細胞增殖試劑（50lL） ， 378C孵育3h 。 取等分物（100lL） ， 在492nm處測定細胞增殖(A).的吸光度這些數據從四個獨立的實驗中結合起來 ， 并歸一化為未涂覆的對照組（p＜0.0001） 。 顯微鏡檢查時間為3100例 。
與對照組相比 ， Dualityt8b涂層不銹鋼的細胞增殖顯著減少（p＜0.001）[圖4(A)] 。 通過對不銹鋼切片的顯微鏡檢查 ， 證實了細胞增殖的減少 。 與未涂層的不銹鋼相比 ， 涂層不銹鋼的表面幾乎沒有細胞[圖4(C)][圖4(B)] 。 當在378C的PBS或HUVEC培養基中培養多達3周時 ， 該涂層都能有效地減少HUVEC的增殖（數據未顯示） 。
通過評估富集血小板制劑或檸檬酸全血在管內孵育3小時后血小板和紅細胞與管腔的粘附情況 ， 評估涂在聚氨酯管表面的配方的血栓形成潛力 。 利用對表面蛋白CD41和CD235的抗體 ， 也完成了對這些細胞的粘附情況的評估 。
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圖5
圖5：血小板和紅細胞與T8B涂層聚氨酯管的粘附 。 在聚氨酯管（2cm長）的管腔內填充血小板懸浮液或全血 ， 并在室溫下孵育3小時 。 然后用PBS清洗試管 ， 并使用針對CD41和CD235的抗體進行檢測 ， 如“材料和方法”中所述 。
如圖5所示 ， 未涂有的聚氨酯管表面容易檢測到血小板和紅細胞粘附 ， 而涂有DualityTMT8B的管表面的粘附明顯減少 。 顯微鏡檢查證實了粘附力的減少（未顯示） 。
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圖6
圖6：血漿蛋白和溶菌酶對未涂層和雙相t8b涂層不銹鋼的吸附 。 離心從正常檸檬酸人全血中分離血漿 ， 與對照(A)或t8b涂層不銹鋼(B)在室溫下孵育18h 。 在相同條件下使用溶菌酶溶液（4mg/mL）溶液 ， 使用對照(C)和T8b涂層(D)不銹鋼 。 底物用PBS沖洗 ， 考馬斯亮藍染色（3500）
圖6中的數據表明 ， DualityTMT8B配方可以顯著降低蛋白質的吸附 。 與DualityTMt8b涂層不銹鋼相比 ， 血漿蛋白的吸附對控制未涂層不銹鋼[圖6(A)]顯著[圖6(B)] 。 此外 ， 高濃度的溶菌酶（4mg/mL）對控制未涂層的不銹鋼也有顯著的吸附作用[圖6(C)] ， 當使用dualitytmt8b涂層材料進行測試時 ， 這也幾乎不存在[圖6(D)] 。
為了確定這種粘附減少是否能在長時間暴露于生物液體后持續存在 ， 全血使用蠕動泵以2mL/min的流速循環長達12天 。 白天在室溫下泵送血液 ， 然后在48攝氏度下保存過夜 ， 每24小時更換一次血液 。 在12天結束時 ， 清洗試管的管腔 ， 用考馬斯亮藍染色 ， 并用光鏡檢查 。