高壓均質對紫貽貝水解液分散穩定性的影響( 二 ) _健康小知識

2.4多肽濃度測定
在不同處理條件下，以4℃離心力4000×g離心15min ，保存不同時間，收集上清液進行多肽濃度測定。上清液中的多肽含量用Watters的方法測定，但稍加修改。具體地說，制備了含有1.5g五水合硫酸銅、6g酒石酸鈉脫水和300mL10%氫氧化鈉的縮二脲試劑，然后將去離子水加入體積為1000mL的體積中生成Watters試劑。
2.5離心式沉淀率測定
按Hu等人的方法測定了樣品的離心沉淀率(R) 。將樣品轉移到80mL離心管中，在4℃下以4000×g離心15min ，通過倒置離心管排出上清液，并用濾紙仔細干燥沉淀物以去除殘留溶液。分別在離心前后準確測定單獨離心管重量和有樣品或沉淀物離心管重量。離心沉淀率(R)計算如下：

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式中， Wp是總的離心沉淀物加上離心管重量(以克為單位) ， Wt是只有離心管的重量，而Ws是樣品加離心管的總克重量。
2.6濁度保留率測定
在相同的位置從液面上取樣品，離心(4000×g ， 15min) ，以避免樣品不均勻導致的濁度差異。在660nm處測量吸光度，并根據以下方程計算濁度保留率(T)：

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式中， COD和SOD分別表示存儲的離心上清液和初始狀態濁度。
2.7熒光光譜觀測
用于分析多肽結構變化的本征熒光通常以色氨酸(Trp)為代表。樣品用蒸餾水稀釋15倍至3mL ，然后使用日立-2700型光譜熒光光度計(日立，日本東京)進行分析。激發波長為290nm ，激發和發射狹縫為5nm 。發射波長范圍為260nm~320nm 。測量是在25℃下進行的。
2.8顆粒大小和Zeta電位的測定
使用ZetaSizer3000HSA激光粒度儀(英國伍斯特郡馬爾文儀器)測定PHM和PHMX溶液的粒度和Zeta電位。樣品用1：5的磷酸鹽緩沖液稀釋，以避免多次散射。 Zeta電位是在25℃下測量的。用強度分布(Di)表征了PHM和PHMX中多肽和黃原膠在貯藏過程中平均粒徑分布的變化。
2.9掃描電子顯微鏡觀察
用掃描電子顯微鏡(JSM-7800F ， JEOL ，日本東京)觀察了PHM和PHMX的微觀結構。在10KV的加速電壓下，更詳細地觀察了多肽和黃原膠顆粒在樣品中的分布形態。在觀察之前，樣品被臨界點干燥，微粒在Ar氣氛中濺射出2nm的金。
2.10統計分析
本文采用單因素重復測量實驗設計。在相同的條件下，對這些值進行三次單獨的測試，并進行三份樣本分析。所有數據均以平均數±標準差表示。為了評估相關性，進行了皮爾遜相關性檢驗。用最小二乘差法比較各處理間的平均值，并在P<0.05處建立顯著性。用SPSS12軟件包(泰國曼谷SPSS泰國有限公司)進行方差分析，并分析變量之間的差異。
3結果與討論
3.1HPH對多肽在PHM中溶解度的影響
我們分析了PHM在儲存過程中多肽沉淀率的變化和PHM的物理穩定性(表1) 。通過測定離心后總可沉降物的百分比來分析PHM的沉降情況。由于顆粒的沉降，該參數的值越大， PHM的穩定性就越低。與PHMX系統相比，均質PHMX系統中的多肽在儲存60d后表現出最好的分散穩定性，且多肽的沉淀率變化不大(P<005) 。具體來說， PHMX儲存60天的離心沉淀率最高(圖1) ，而PHM+HPH組的離心沉淀率最低。由于在PHMX樣品中加入黃原膠，多肽和黃原膠不均一就不能形成穩定的結構，導致黃原膠大量析出。均相樣品(PHM+HPh和PHMX+HPh)的濁度保留率顯著高于未經處理的樣品(PhM和PhmX) ，表明HPh預處理顯著提高了多肽體系的分散穩定性。這一結果可能歸因于HPH增加了多肽的溶解度，減小了多肽和/或黃原膠的顆粒尺寸，導致了HPH后PHMX形成致密而均勻的凝膠網絡(表2) 。這種致密、均勻的微觀結構有助于提高體系的分散穩定性。類似地， Wu等人報道說，增加多肽的溶解度和減小顆粒尺寸可以提高持水率，這有利于體系的穩定性。