這一簡單的分析結果其實給我們提供了很多信息：
1.細胞外基質變化是腫瘤免疫逃逸重要的一種方式（下次給大家講講如何利用免疫逃逸的幾種不同機制設計課題） ， 其中包括膠原、糖蛋白等多種成分 ， 因此根據細胞外基質通路富集這一結果就能夠提出這樣的科學問題：某細胞外基質調控蛋白（主角分子）是否通過細胞外基質提高MIBC腫瘤細胞的聯合治療抵抗 ， 促進免疫逃逸？
2.再根據KEGG富集到的經典通路我們發現 ， IL-17和細胞因子/受體互作通路是密切相關的 ， 而IL-17是免疫調節因子 ， 激活免疫細胞的MAPK通路（這不就連上了） ， 因此MIBC聯合治療抵抗也能往T細胞功能抑制/耗竭方向探究機制 。
3.再者 ， TNF信號通路與細胞程序性死亡密切相關 ， 尤其是凋亡、壞死性凋亡 ， 那么也可以往腫瘤細胞抑制自身程序性死亡或誘導周圍其它細胞死亡的角度設計課題 ， 從而可以串起化療和免疫治療 ， 呼應聯合治療抵抗的問題 。

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圖2聯合治療下響應和非響應患者樣本的普通轉錄組測序分析
再來看看單細胞測序數據 。 這個分析是基于對MIBC患者單獨進行免疫檢查點抗體（替雷利珠單抗）治療展開的 ， 主要將治療響應和非響應患者的腫瘤細胞進行亞群細分并比較 。 這在之前的一些腫瘤單細胞分析文章中很少出現 ， 算是比較獨特的角度 。 文中把細胞分為5個亞群 ， 四種類型 ， 分別是中性粒細胞亞群（中性粒細胞調控通路高富集）、RNA分解代謝亞群（RNA分解代謝通路高富集）、RNA剪接亞群（RNA剪接通路高富集）和細胞周期亞群（細胞周期改變相關通路高富集） 。 其中 ， 細胞周期亞群治療抵抗組中的占比顯著降低（H） 。
這個結果也很有看點 。 首先 ， 腫瘤的主要特征是有旺盛的分裂能力 ， 對應活躍的細胞周期 。 然后這個結果顯示 ， 在治療抵抗患者腫瘤內 ， 可能是由于化療和免疫治療的雙重壓力下 ， 細胞開始調整細胞周期以躲避治療 ， 那么我們就能提出問題：聯合治療抵抗的細胞細胞周期蛋白是否下調表達？腫瘤是否會趨向于向休眠方向發展？因而就可以提出“腫瘤細胞休眠和MIBC新輔助聯合治療抵抗的關系”的課題方向 ， 相信也是頗具創新性的 。

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圖3免疫治療下響應和非響應患者的腫瘤細胞單細胞測序分析
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有了課題思路需要怎么做？
以上就是通過這篇臨床研究能夠拓展的課題方向了 ， 但是有了思路之后呢？
當然是開始驗證吶！
如果自己剛好能接觸到和文中治療方案一致（或類似）的樣本 ， 不要猶豫 ， 通路檢測和免疫熒光趕緊做起來！如果剛好能篩選到合適的主角分子進一步研究 ， 那么無論對于發表文章還是國自然 ， 想必都是非常好的課題 。
如果手頭上接觸不到相關的樣本 ， 或者并沒有腫瘤免疫相關的研究基礎也沒有關系！相關的思路已經有了 ， 那運用類似思路針對自己已有樣本當然也可以一樣研究一波（畢竟現在測序成本已經比較低） 。 實在不行 ， 每年新發表的臨床文章那么多 ， 只要學會了方法 ， 挖掘出新穎的、有價值的、與臨床問題緊密結合的課題方向還會遠嗎？
總之 ， 已發表的臨床數據是我們發現課題、挖掘國自然科學問題、提升課題研究價值非常好用的工具 ， 大家千萬不要浪費呀！
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【他山之石可以攻玉：談談用別人的臨床數據設計自己的基礎研究課題