在馴化過程中 ， 我們發現避免非常高的細胞密度很重要 ， 因為這會導致聚集現象 。 一般來說 ， 我們將細胞密度維持在2.5×106個細胞/mL以下 。 細胞聚集體可能會降低轉染效率并導致在放大生產規模中出現問題 。 重要的是 ， 我們還確認了HEK293細胞也可以在具有類似的性能的HyCell?TransFx-H培養基中馴化和培養 。 由于SV40大T抗原的存在 ， 我們討論了AAV生產的HEK293T細胞在法規上的可接受性 。 因此在許多情況下應首選HEK293細胞 。
我們在ReadyToProcessWAVE?25中放大了rAAV5材料的生產規模 ， 產生了高病毒滴度和高百分比的完整衣殼 ， 而且工藝可放大并非?？煽?。 對生產rAAV5的rAAV2轉染方案進行了驗證 ， 可以達到如下質粒純化最佳標準：qPCR≥1×1013VG/LELISA≥1×1014VP/L完整衣殼百分比≥10%
在這些條件下完全符合rAAV5收獲材料的所有標準 。
因此 ， 我們認為本文描述的優化轉染方案適用于多種AAV血清型 ， 并且可以放大到生產臨床級AAV載體所需的體積 。 盡管我們在本文中描述的是針對AAV2和AAV5的優化 ， 但該策略也已成功用于AAV8和AAV9（目前正在進行中）（來源思拓凡）返回搜狐 ， 查看更多
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