小鼠心肌纖維化影響肥厚型心肌病方案設計分享——Apelin-13/Sphk1/S1P/Rho( 二 ) _健康小知識

（3）cTnIR145G轉化的心肌細胞+NC-siRNA
（4）cTnIR145G轉化的心肌細胞+Apelin-13處理濃度100nmol/L ， 48h
（5）cTnIR145G轉化的心肌細胞+Apelin-13處理濃度100nmol/L ， 48h+siRNA-S1P2
（6）cTnIR145G轉化的心肌細胞+Apelin-13處理濃度100nmol/L ， 48h+NC-siRNA
（7）cTnIR145G轉化的心肌細胞+SKI-Ⅱ（SphK1抑制劑）10uM ， 20min；
（8）cTnIR145G轉化的心肌細胞+SKI-Ⅱ（SphK1抑制劑）10uM ， 20min+Apelin-13處理濃度100nmol/L ， 48h
（9）cTnIR145G轉化的心肌細胞+CompoundC（AMPK抑制劑）10μmol/L ， 20min；
（10）cTnIR145G轉化的心肌細胞+10μmol/LCompoundC抑制劑20min+Apelin-13處理濃度100nmol/L ， 48h
（11）cTnIR145G轉化的心肌細胞+3-TYP（SIRT3抑制劑）；
（12）cTnIR145G轉化的心肌細胞+Apelin-13處理濃度72小時+SIRT3抑制劑；
檢測
（1）QPCR檢測S1P2、SphK1、PGC-1α、FoxO3a、AMPK、SIRT3
（2）WB檢測：CollIα1、β-肌球蛋白重量、S1P2、SphK1、AMPK、p-AMPK、PGC-1α、FoxO3a、p-FoxO3a；
（3）免疫熒光染色：β-肌球蛋白重量、αSMA；
（4）TUNEL法及流式細胞術檢測心肌成纖維細胞凋亡；
（5）檢測細胞內ROS含量和ATP含量；
五、利用轉基因小鼠從整體探討Apelin-13通過TGF-β/SphK1/S1P信號通路抑制心肌纖維化的機制
（1）野生型小鼠
（2）肥厚型心肌病（HCM）轉基因小鼠（cTnIR145G轉基因小鼠）
（3）肥厚型心肌病（HCM）轉基因小鼠（cTnIR145G轉基因小鼠）+安慰劑組干預3月
（4）肥厚型心肌病（HCM）轉基因小鼠（cTnIR145G轉基因小鼠）+apelin-13干預3月
（5）肥厚型心肌病（HCM）轉基因小鼠（cTnIR145G轉基因小鼠）+apelin-13干預組+SphK1抑制劑
（6）肥厚型心肌病（HCM）轉基因小鼠（cTnIR145G轉基因小鼠）+apelin-13干預組+SIRT3抑制劑
3個月后取心臟樣本，進行后續檢測；
（1）HE和masson染色，拍照，病理分析；
(2）免疫組化檢測1P2、β-肌球蛋白重量、α-SMA、CollIα1、SIRT3、AMPK、p-AMPK評價心肌纖維化的程度和變化;
(3）QPCR和WB檢測TGFβ、SphK1、S1P2、CollIα1、β-肌球蛋白重量、SIRT3、Fox03a、p-Fox03a、AMPK、p-AMPK；
（4）ATP試劑盒檢測心臟組織中ATP；
（5）TUNEL凋亡檢測心肌細胞凋亡；
（6）投射電鏡觀察心肌組織超微結果。
下列為我們項目中的實驗結果例圖，大家可以參考學習：

文章圖片
WB

文章圖片
流式凋亡

文章圖片
免疫組化

文章圖片
HE
上述方案為我們通過文獻調研后推測的可能分子機制，涉及的所有檢測方法的原理以及目的我們非常熟練，通過細胞實驗和動物實驗嚴謹的講述了Apelin-13/Sphk1/S1P/Rho在心肌纖維化中的作用，從而調控肥厚型心肌病。如果想證實這個機制，需要按上述方案進行科學實驗，獲得實際檢測數據后進行驗證分析。如果你有其他類似機制想要探究，比如膀胱癌發生機制或者其他疾病，都可以參考上述方案進行探究。此外還可以結合轉錄組、代謝組、蛋白組以及甲基化組學測序方式進行聯合分析，對纖維化心肌病的可能機制進行更完善的解答，為臨床疾病的預防和治療提供更多參考依據。返回搜狐，查看更多
【小鼠心肌纖維化影響肥厚型心肌病方案設計分享——Apelin-13/Sphk1/S1P/Rho】責任編輯：