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_pcwzy|基于微珠的多重PCR和多重ELISA-泰瑞鏡下顯微熒光平臺簡介

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泰立瑞病理
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關鍵詞：多重PCR、實時PCR（Real time PCR）、多重ELISA、細胞因子、自身抗體、抗核抗體（ANA）、自體免疫疾病診斷、系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎（RA）、系統性硬化癥、核酸雜交、免疫熒光；微珠；顯微鏡成像技術、自動熒光顯微鏡定制化
泰立瑞的泰瑞鏡下（TR-sWSI）是一個高度通用的顯微鏡平臺 ， 之前泰立瑞僅僅用于載體為切片的病理全切片明場、熒光掃描、分析 ， 現在泰立瑞將其延伸到同樣適用于溶液的、基于微珠技術的圖像采集、分析（例如多重聚合酶鏈式反應mPCR、多重ELISA）和細胞模式識別 。 其在動態、加熱條件下跟蹤變化的多重、實時能力使其成為實時PCR（real time PCR）和監測核酸雜交動力學的有用工具 ， 這些實時動力學數據是那些使用終點檢測技術無法獲取的 。 本文將介紹泰瑞鏡下平臺的技術原理 ， 介紹基于微珠技術檢測各種生物分子（包括抗原、抗體、肽、寡核苷酸和DNA擴增產物）的的解決方案 ， TR-sWSI的廣泛適應性和多功能性使其極具有競爭優勢 。醫學、生命科學的許多驚人成就都基于創新分析技術的進展 。 大多數這些技術平臺都具有高度的技術復雜性 ， 但僅適用于一種應用 。 其中大多數只能夠同一樣本中檢測一個目標 ， 不能進行多重檢測（multiplex assay）（多重水平從小于10個到較高數目大于1000） 。 而且許多技術 ， 如平面微陣列 ， 無法理想地測量動力學數據 ， 而只提供終點測量 。 而且常常一個項目中 ， 可能需要進行從酶分析、核酸擴增和雜交到抗原/抗體檢測的測量 。 為所有這些不同的任務提供的檢測設備累計起來可能相當昂貴 ， 并且需要實驗室空間很大 。 南京泰立瑞的顯微掃描的TR-sWSI-FLUO技術 ， 為用戶提供了廣泛的應用 ， 檢測對象包括細胞、核酸和蛋白質 ， 覆蓋組織切片、多重ELISA、多重PCR(需要整合的加熱/冷卻裝置即熱循環儀)等常用分析技術 。TR-sWSI-FLUO由泰立瑞開發的軟件TR-sWSI-Fluo和硬件組件組成（3-5個熒光通道的倒置熒光顯微鏡、運動掃描臺、至少有130萬像素的數碼相機以及可選的加熱/冷卻裝置（HCU）） 。 TR-sWSI-Fluo軟件采取模塊化設計 ， 可以為不同的測量任務由不同分析模塊完成 ， 例如微珠測量、熒光讀數和計數的模塊 。 掃描運動平臺支持任何透明平面底部的樣品載體 ， 例如96-384孔板的多重ELISA、多重PCR ， 細菌檢測和計數和顯微鏡載玻片等 。
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圖一-A
展開全文TR-sWSI-Fluo可以將HCU整合進來 。 該HCU裝置使用珀耳帖元件（Peltier elements） ， 可以定制化到掃描運動平臺中（圖一-A） ， 其加熱和冷卻速率分別高達10度/s ， 溫度范圍在15~105°C之間 ， 溫度分辨率小于0.1℃ 。
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圖一
圖一. 泰立瑞.TR-sWSI-FLUO平臺 ， 包括硬件部件和加熱/冷卻裝置的示意圖, 左圖顯示包括照明光源、CCD或CMOS相機、濾鏡和物鏡的光學系統 ， 設計取倒置顯微鏡模式 ， 對96孔PCR板或96孔ELISA板進行圖像采集 。 右圖顯示整合了溫控系統的示意圖 。TR-sWSI-FLUO技術能在不同時間點多次測量同一個微珠以獲得實時反應動力學 。 流式細胞儀技術常用于測量多重微珠（多種血球、多種熒光標記的細胞亞群的分析） ， 但使用流式細胞儀不能在不同時間點多次測量同一個微珠以獲得實時反應動力學 。 泰立瑞的TR-sWSI-FLUO技術克服這些缺點 ， 開發了基于微珠的核酸和蛋白質圖像自動采集和分析技術 。 更具體的 ， 該技術基于一組組具備特定大小尺寸和以兩種不同染料以特定混合比例（產生不同的顏色）的微球 ， 同樣大小但不同顏色的被認為是不同的微球 ， 同理 ， 不同大小但相同顏色的也被認為是不同的微球 ， 也被賦予不同的編碼 。 微球的識別基于其大小和顏色（顯微圖像采集和算法） ， 每組微球被給予一個不同的編碼 ， N種大小和M顏色可以編碼N*M種微球 。 這是一種非常簡單但非常有效的編碼策略 ， 一個編碼的微球僅被賦予一種被分析物 ， 允許在多重分析中通過編碼（大小和顏色）識別單個微球從而在同一溶液種進行多重檢測 。